Massenspektrometrie

Die Massenspektrometrie bestätigt die Peptididentität durch Abgleich der gemessenen mit der theoretischen Masse. So lesen Sie die MS-Zeile im COA.

Die Massenspektrometrie (MS) ionisiert eine Probe und misst Masse-zu-Ladung-Verhältnisse, aus denen die Molekülmasse berechnet wird. Auf einem Peptidzertifikat beantwortet sie die Identitätsfrage, die die Chromatographie nicht beantworten kann: Ist das Molekül in diesem Vial die Sequenz auf dem Etikett? Elektrospray-Ionisierung (ESI-MS) und MALDI-TOF sind die beiden üblicherweise genannten Methoden.

Die MS-Zeile lesen

Vergleichen Sie die gemessene Masse mit der aus der Sequenz berechneten theoretischen Masse. Beide sollten innerhalb der angegebenen Gerätetoleranz übereinstimmen — typischerweise ein Bruchteil eines Daltons bei einem modernen ESI-Gerät, einige Dalton bei MALDI-TOF. ESI-Spektren von Peptiden zeigen eine Serie mehrfach geladener Ionen ([M+2H]2+, [M+3H]3+), die eine Software zu einer einzigen Neutralmasse dekonvoluiert; ein Zertifikat, das nur einen rohen m/z-Wert ohne Angabe des Ladungszustands berichtet, ist unvollständig.

Diagnostische Massendifferenzen

Häufige Abweichungen sind aufschlussreich: +16 Da deutet auf Oxidation hin, typischerweise an Methionin; −0.98 Da unterscheidet ein C-terminales Amid von der freien Säure; +42 Da weist auf Acetylierung hin; +1 Da kann Deamidierung bedeuten. Eine Abweichung um genau die Masse eines Rests deutet auf eine Deletion oder Substitution hin.

Warum das wichtig ist

Ein hoher HPLC-Wert für das falsche Molekül ist wertlos. Identität plus Reinheit für dieselbe Charge ist das minimale glaubwürdige Wertepaar auf einem Analysenzertifikat.

Siehe Massenspektrometrie und Peptididentität.