Espectrometria de massa

A espectrometria de massa confirma a identidade de um péptido comparando a massa observada com a massa teórica da sequência. Como ler a linha de MS num COA.

A espectrometria de massa (MS) ioniza uma amostra e mede razões massa/carga, a partir das quais se calcula a massa molecular. Num certificado de um péptido, responde à questão da identidade a que a cromatografia não consegue responder: a molécula neste frasco é a sequência indicada no rótulo? A ionização por electrospray (ESI-MS) e o MALDI-TOF são os dois métodos habitualmente citados.

Ler a linha de MS

Compare a massa observada com a massa teórica calculada a partir da sequência. Devem coincidir dentro da tolerância declarada do instrumento — normalmente uma fração de dalton num instrumento ESI moderno, alguns daltons em MALDI-TOF. Os espetros ESI de péptidos mostram uma série de iões com cargas múltiplas ([M+2H]2+, [M+3H]3+) que o software desconvolui numa única massa neutra; um certificado que reporte apenas um m/z bruto sem indicar o estado de carga está incompleto.

Diferenças de massa diagnósticas

Os desvios comuns são informativos: +16 Da sugere oxidação, normalmente na metionina; −0,98 Da distingue uma amida C-terminal do ácido livre; +42 Da indica acetilação; +1 Da pode significar desamidação. Uma discrepância igual à massa de um resíduo aponta para uma deleção ou substituição.

Porque é importante

Um valor elevado de HPLC para a molécula errada não tem valor. Identidade e pureza para o mesmo lote são o par mínimo credível num certificado de análise.

Veja espectrometria de massa e identidade de péptidos.