Spectrometrie de masă

Spectrometria de masă confirmă identitatea peptidei comparând masa observată cu masa teoretică a secvenței. Cum se citește rândul MS dintr-un COA.

Spectrometria de masă (MS) ionizează o probă și măsoară rapoartele masă/sarcină, din care se calculează masa moleculară. Într-un certificat pentru peptide, ea răspunde la întrebarea de identitate la care cromatografia nu poate răspunde: este molecula din acest flacon secvența de pe etichetă? Ionizarea prin electrospray (ESI-MS) și MALDI-TOF sunt cele două metode citate de obicei.

Citirea rândului MS

Comparați masa observată cu masa teoretică calculată din secvență. Acestea ar trebui să concorde în limita toleranței declarate a instrumentului — de regulă o fracțiune de dalton pe un instrument ESI modern, câțiva daltoni pe MALDI-TOF. Spectrele ESI ale peptidelor prezintă o serie de ioni cu sarcini multiple ([M+2H]2+, [M+3H]3+), pe care software-ul îi deconvoluționează într-o singură masă neutră; un certificat care raportează doar un m/z brut fără a preciza starea de sarcină este incomplet.

Diferențe de masă diagnostice

Deplasările frecvente sunt informative: +16 Da sugerează oxidare, de regulă la metionină; −0,98 Da distinge o amidă C-terminală de acidul liber; +42 Da indică acetilare; +1 Da poate însemna deamidare. O nepotrivire egală exact cu masa unui rest indică o deleție sau o substituție.

De ce contează

O valoare HPLC ridicată pentru o moleculă greșită nu valorează nimic. Identitatea plus puritatea pentru același lot reprezintă perechea minimă credibilă într-un certificat de analiză.

Consultați spectrometria de masă și identitatea peptidelor.