Woordenlijst
Vastefasepeptidesynthese (SPPS)
SPPS bouwt een peptideketen op hars op, C-terminus eerst, met één ronde ontscherming en koppeling per residu. Waarom het koppelingsrendement het plafond voor zuiverheid bepaalt.
Vastefasepeptidesynthese is de methode die Bruce Merrifield in 1963 introduceerde en waarvoor hij in 1984 de Nobelprijs voor Scheikunde ontving. De keten wordt met de C-terminus verankerd aan een onoplosbaar polymeerbolletje en naar de N-terminus toe verlengd. Elk residu vereist één ronde van ontscherming, koppeling met een geactiveerd aminozuur met beschermde zijketen, en wassen — omdat de groeiende keten is geïmmobiliseerd, worden overtollige reagentia eenvoudig weggespoeld in plaats van chromatografisch gescheiden.
Waarom SPPS ertoe doet in peptideonderzoek
Het koppelingsrendement bepaalt het plafond van de haalbare zuiverheid, en de rekensom is onverbiddelijk. Bij 99% per stap levert een peptide van 30 residuen ongeveer 74% product over de volledige lengte op; bij 98% slechts 55%. Al het overige zijn deletie- en truncatiesequenties die met preparatieve HPLC moeten worden verwijderd; daarom kosten langere peptiden per milligram onevenredig veel meer en maakt chemische synthese boven ongeveer 50 residuen plaats voor recombinante expressie.
De moderne praktijk gebruikt Fmoc-chemie met ontscherming door piperidine en afsplitsing in trifluorazijnzuur; zo belanden peptiden als TFA-zout, tenzij ze worden uitgewisseld. Moeilijke sequenties met aggregerende stukken drukken het rendement. Zie synthetische peptiden en HPLC-zuiverheid uitgelegd.
Gerelateerde termen
beschermgroep · zuiverheid · peptidebinding