Glossário
Síntese de péptidos em fase sólida (SPPS)
A SPPS constrói a cadeia sobre resina, a partir do terminal C, com um ciclo de desproteção e acoplamento por resíduo. Porque a eficiência limita a pureza.
A síntese de péptidos em fase sólida é o método introduzido por Bruce Merrifield em 1963, pelo qual recebeu o Prémio Nobel da Química de 1984. A cadeia é ancorada pelo seu terminal C a uma esfera de polímero insolúvel e prolongada em direção ao terminal N. Cada resíduo exige um ciclo de desproteção, acoplamento com um aminoácido ativado e com as cadeias laterais protegidas, e lavagem — como a cadeia em crescimento está imobilizada, os reagentes em excesso são simplesmente removidos por lavagem em vez de separados por cromatografia.
Porque a SPPS é importante na investigação de péptidos
A eficiência de acoplamento define o teto da pureza alcançável, e a aritmética é implacável. Com 99% por passo, um péptido de 30 resíduos dá cerca de 74% de produto completo; com 98%, apenas 55%. Todo o resto são sequências de deleção e de truncagem que têm de ser removidas por HPLC preparativa, razão pela qual os péptidos mais longos custam desproporcionalmente mais por miligrama e pela qual a síntese química dá lugar à expressão recombinante acima de cerca de 50 resíduos.
A prática moderna utiliza química Fmoc com desproteção por piperidina e clivagem em ácido trifluoroacético, que é a razão pela qual os péptidos acabam como sal de TFA, salvo se forem sujeitos a troca. Sequências difíceis, com troços propensos à agregação, reduzem a eficiência. Veja péptidos sintéticos e a pureza por HPLC explicada.
Termos relacionados
grupo protetor · pureza · ligação peptídica