Glosario
Síntesis de péptidos en fase sólida (SPPS)
La SPPS construye la cadena sobre resina desde el extremo C-terminal, con un ciclo de desprotección y acoplamiento por residuo. Por qué eso limita la pureza.
La síntesis de péptidos en fase sólida es el método introducido por Bruce Merrifield en 1963, por el que recibió el Premio Nobel de Química de 1984. La cadena se ancla por su extremo C-terminal a una bola de polímero insoluble y se alarga hacia el extremo N-terminal. Cada residuo requiere una ronda de desprotección, acoplamiento con un aminoácido activado y con la cadena lateral protegida, y lavado; como la cadena en crecimiento está inmovilizada, los reactivos en exceso simplemente se eliminan por lavado en lugar de separarse por cromatografía.
Por qué importa la SPPS en la investigación con péptidos
La eficiencia de acoplamiento fija el techo de la pureza alcanzable, y el cálculo es implacable. Con un 99% por paso, un péptido de 30 residuos da aproximadamente un 74% de producto de longitud completa; con un 98%, solo un 55%. Todo lo demás son secuencias de deleción y truncamiento que deben eliminarse por HPLC preparativa, razón por la que los péptidos más largos cuestan desproporcionadamente más por miligramo y por la que la síntesis química cede el paso a la expresión recombinante por encima de unos 50 residuos.
La práctica actual emplea la química Fmoc con desprotección con piperidina y escisión en ácido trifluoroacético, que es la razón por la que los péptidos acaban como sal de TFA salvo que se realice un intercambio. Las secuencias difíciles con tramos que tienden a agregarse reducen la eficiencia. Consulte los péptidos sintéticos y la pureza HPLC explicada.
Términos relacionados
grupo protector · pureza · enlace peptídico