Glossario
Sintesi peptidica in fase solida (SPPS)
La SPPS costruisce la catena su resina, dal C-terminale, con un ciclo di deprotezione e accoppiamento per residuo. Perché la resa fissa il tetto di purezza.
La sintesi peptidica in fase solida è il metodo introdotto da Bruce Merrifield nel 1963, per il quale ricevette il premio Nobel per la chimica nel 1984. La catena è ancorata con il C-terminale a una sfera polimerica insolubile ed estesa verso l'N-terminale. Ogni residuo richiede un ciclo di deprotezione, accoppiamento con un amminoacido attivato e protetto sulla catena laterale, e lavaggio: poiché la catena in crescita è immobilizzata, i reagenti in eccesso vengono semplicemente eliminati con il lavaggio anziché separati per cromatografia.
Perché la SPPS è importante nella ricerca sui peptidi
L'efficienza di accoppiamento fissa il tetto della purezza ottenibile, e i numeri non perdonano. Al 99% per passaggio, un peptide di 30 residui fornisce circa il 74% di prodotto a lunghezza completa; al 98%, solo il 55%. Tutto il resto sono sequenze con delezioni e troncamenti da rimuovere mediante HPLC preparativa, ed è per questo che i peptidi più lunghi costano in proporzione molto di più per milligrammo e che la sintesi chimica cede il passo all'espressione ricombinante oltre i 50 residui circa.
La prassi moderna impiega la chimica Fmoc con deprotezione mediante piperidina e distacco in acido trifluoroacetico, ed è così che i peptidi finiscono per essere un sale TFA, a meno che non venga effettuato uno scambio. Le sequenze difficili con tratti che tendono ad aggregare riducono l'efficienza. Si vedano i peptidi sintetici e la purezza HPLC spiegata.
Termini correlati
gruppo protettore · purezza · legame peptidico