Cyklus zmrazení a rozmrazení

Cyklus zmrazení a rozmrazení je jeden úplný přechod roztoku ze zmrazeného stavu do kapalného a zpět. Studie stability uvádějí toleranci v počtu takových opakování, protože poškození je kumulativní a závisí na počtu přechodů, nikoli na celkové době strávené ve zmrazeném stavu.

Proč je poškození zmrazením a rozmrazením ve výzkumu peptidů důležité

Během fázového přechodu působí tři mechanismy. Při tvorbě ledu jsou rozpuštěné látky vytlačovány z krystalové mřížky a prudce se koncentrují ve zmenšující se kapalné frakci, takže místní koncentrace peptidu a solí stoupají daleko nad nominální hodnotu. Složky pufru mohou krystalizovat v různých bodech — o fosfátových pufrech sodných je známo, že při zmrazení posunou pH o více než jednu jednotku — a vystavují tak peptid podmínkám, s nimiž se při pokojové teplotě nikdy nesetká. A každé rozhraní led–voda nabízí povrch, na němž se částečně rozbalené řetězce nevratně spojují.

Viditelným výsledkem je zákal, částice nebo pokles naměřené účinnosti; neviditelným je pomalá ztráta intaktní formy, kterou by odhalila pouze nová kontrola HPLC. Standardní ochranou je rozdělit rekonstituovaný zásobní roztok před prvním zmrazením na jednorázové alikvoty s použitím sterilních prázdných lahviček. Praktické podrobnosti jsou v průvodci skladováním a v průvodci alikvotací.

Související pojmy

stabilita · degradace · chladový řetězec