Einfrier-Auftau-Zyklus

Ein Einfrier-Auftau-Zyklus ist ein vollständiger Durchgang einer Lösung vom gefrorenen in den flüssigen Zustand und zurück. Stabilitätsstudien geben die Toleranz in der Anzahl solcher Wiederholungen an, weil der Schaden kumulativ ist und davon abhängt, wie viele Übergänge stattfinden, nicht von der gesamten Zeit im gefrorenen Zustand.

Warum Einfrier-Auftau-Schäden in der Peptidforschung wichtig sind

Während des Phasenübergangs wirken drei Mechanismen. Bei der Eisbildung werden gelöste Stoffe aus dem Kristallgitter ausgeschlossen und konzentrieren sich stark in der schrumpfenden flüssigen Fraktion, sodass lokale Peptid- und Salzkonzentrationen weit über den Nennwert steigen. Pufferkomponenten können zu unterschiedlichen Zeitpunkten kristallisieren — von Natriumphosphatpuffern ist bekannt, dass sich ihr pH-Wert beim Einfrieren um mehr als eine Einheit verschiebt —, wodurch das Peptid Bedingungen ausgesetzt wird, die es bei Raumtemperatur nie erlebt. Und jede Eis-Wasser-Grenzfläche bietet eine Oberfläche, an der teilweise entfaltete Ketten irreversibel assoziieren.

Das sichtbare Ergebnis sind Trübung, Partikel oder ein Rückgang der gemessenen Wirksamkeit; das unsichtbare ist ein langsamer Verlust der intakten Spezies, den nur eine erneute HPLC-Prüfung aufdecken würde. Die Standardabwehr besteht darin, eine rekonstituierte Stammlösung vor dem ersten Einfrieren in Einmal-Aliquots aufzuteilen, unter Verwendung steriler Leer-Vials. Praktische Details finden Sie im Leitfaden zur Lagerung und im Leitfaden zum Aliquotieren.

Verwandte Begriffe

Stabilität · Abbau · Kühlkette