Ciclo di congelamento–scongelamento

Un ciclo di congelamento–scongelamento è un passaggio completo di una soluzione dallo stato congelato a quello liquido e ritorno. Gli studi di stabilità esprimono la tolleranza in numero di tali ripetizioni perché il danno è cumulativo e dipende da quante transizioni avvengono, non dal tempo totale trascorso allo stato congelato.

Perché il danno da congelamento–scongelamento è importante nella ricerca sui peptidi

Durante il cambiamento di fase operano tre meccanismi. Quando si forma il ghiaccio, le specie disciolte vengono escluse dal reticolo cristallino e si concentrano bruscamente nella frazione liquida che si riduce, per cui le concentrazioni locali di peptide e sali salgono ben al di sopra dei valori nominali. I componenti del tampone possono cristallizzare in momenti diversi — i tamponi al fosfato di sodio sono noti per spostare il pH di oltre un'unità al congelamento — esponendo il peptide a condizioni che non incontra mai a temperatura ambiente. Infine ogni interfaccia ghiaccio-acqua offre una superficie su cui catene parzialmente denaturate si associano in modo irreversibile.

Il risultato visibile è torbidità, particolato o un calo della potenza misurata; quello invisibile è una lenta perdita della specie intatta che solo un nuovo controllo HPLC rivelerebbe. La difesa standard consiste nel suddividere la soluzione madre ricostituita in aliquote monouso prima del primo congelamento, utilizzando flaconcini vuoti sterili. I dettagli pratici si trovano nella guida alla conservazione e nella guida all'aliquotazione.

Termini correlati

stabilità · degradazione · catena del freddo