Glossario
IgG purificate
IgG purificate indica la frazione immunoglobulinica isolata dal siero. La purificazione con Proteina A/G e quella per affinità al peptide non coincidono.
IgG purificate significa che la frazione di immunoglobuline G è stata separata dal resto dell'antisiero. L'etichetta nasconde una distinzione importante, e una scheda tecnica che non specifica quale metodo sia stato usato è incompleta.
Due purificazioni molto diverse
La purificazione con Proteina A o Proteina G cattura le IgG attraverso la regione Fc. Rimuove albumina, proteasi e proteine del siero diverse dalle IgG, e fornisce una soluzione a concentrazione nota in mg/mL adatta alla coniugazione; tuttavia vengono catturate tutte le IgG dell'animale, per cui la frazione specifica per il bersaglio può rappresentare ancora solo una piccola percentuale del totale. Proteina A e Proteina G differiscono nell'affinità per le specie ospite e le sottoclassi, ed è per questo che la specie ospite è sempre indicata.
La purificazione per affinità all'antigene fa passare il siero su peptide immobilizzato ed eluisce solo gli anticorpi che lo legano. Il prodotto è costituito da IgG specifiche per il bersaglio, dà un background nettamente inferiore ed è la scelta giusta per immunoistochimica, coniugazione e qualsiasi ELISA quantitativo. La resa è molto più bassa, e l'eluizione a pH basso o con agenti caotropici può danneggiare i cloni più avidi.
In entrambi i casi, le IgG purificate sono indicate in mg/mL, il che consente una vera titolazione anziché le congetture sul fattore di diluizione proprie del siero intero.
Termini e materiali correlati
policlonale vs monoclonale · peptide bloccante · immunogeno. Materiale di riferimento: anticorpi, anticorpi marcati. Approfondimenti: antisiero vs IgG purificate.