Gezuiverd IgG

Gezuiverd IgG betekent dat de immunoglobuline G-fractie van de rest van het antiserum is gescheiden. Het etiket verhult een belangrijk onderscheid, en een datasheet die niet vermeldt welke methode is gebruikt, is onvolledig.

Twee zeer verschillende zuiveringen

Zuivering met proteïne A of proteïne G vangt IgG via het Fc-gebied. Ze verwijdert albumine, proteasen en niet-IgG-serumeiwit en levert een oplossing met een bekende concentratie in mg/mL die geschikt is voor conjugatie — maar elk IgG van het dier wordt gevangen, dus de doelwitspecifieke fractie kan nog steeds slechts een klein percentage van het totaal zijn. Proteïne A en proteïne G verschillen in affiniteit voor gastheersoorten en subklassen, en daarom wordt de gastheer altijd vermeld.

Bij antigeenaffiniteitszuivering wordt het serum over geïmmobiliseerd peptide geleid en worden alleen antilichamen geëlueerd die eraan binden. Het product is doelwitspecifiek IgG, geeft een duidelijk lagere achtergrond en is de juiste keuze voor immunohistochemie, conjugatie en elke kwantitatieve ELISA. De opbrengst is veel lager, en de elutie bij lage pH of met chaotrope middelen kan de meest aviede klonen beschadigen.

In beide gevallen wordt gezuiverd IgG in mg/mL opgegeven, wat echte titratie mogelijk maakt in plaats van het giswerk met verdunningsfactoren bij volledig serum.

Gerelateerde termen en materiaal

polyklonaal versus monoklonaal · blokkerend peptide · immunogeen. Referentiemateriaal: antilichamen, gelabelde antilichamen. Verder lezen: antiserum versus gezuiverd IgG.