Gereinigtes IgG

Gereinigtes IgG bedeutet, dass die Immunglobulin-G-Fraktion vom Rest des Antiserums abgetrennt wurde. Die Bezeichnung verbirgt eine wichtige Unterscheidung, und ein Datenblatt, das die verwendete Methode nicht angibt, ist unvollständig.

Zwei sehr unterschiedliche Reinigungen

Die Reinigung über Protein A oder Protein G fängt IgG über seine Fc-Region ein. Sie entfernt Albumin, Proteasen und Nicht-IgG-Serumproteine und liefert eine Lösung bekannter Konzentration in mg/mL, die sich für die Konjugation eignet — doch es wird sämtliches IgG des Tieres eingefangen, sodass der zielspezifische Anteil weiterhin nur wenige Prozent des Gesamtgehalts ausmachen kann. Protein A und Protein G unterscheiden sich in ihrer Affinität zu Wirtsspezies und Subklassen, weshalb der Wirt stets angegeben wird.

Bei der Antigen-Affinitätsreinigung wird das Serum über immobilisiertes Peptid geleitet, und nur die Antikörper, die daran binden, werden eluiert. Das Produkt ist zielspezifisches IgG, liefert einen deutlich geringeren Hintergrund und ist die richtige Wahl für Immunhistochemie, Konjugation und jeden quantitativen ELISA. Die Ausbeute ist viel geringer, und die Elution bei niedrigem pH oder mit chaotropen Mitteln kann die avidesten Klone schädigen.

In beiden Fällen wird gereinigtes IgG in mg/mL angegeben, was eine echte Titration ermöglicht statt des Rätselratens über Verdünnungsfaktoren bei Vollserum.

Verwandte Begriffe und Materialien

polyklonal vs. monoklonal · Blocking-Peptid · Immunogen. Referenzmaterial: Antikörper, markierte Antikörper. Weiterführende Lektüre: Antiserum vs. gereinigtes IgG.