IgG purifiée

IgG purifiée signifie que la fraction d’immunoglobulines G a été séparée du reste de l’antisérum. Cette mention de l’étiquette masque une distinction importante, et une fiche technique qui ne précise pas la méthode employée est incomplète.

Deux purifications très différentes

La purification par protéine A ou protéine G capture les IgG par leur région Fc. Elle élimine l’albumine, les protéases et les protéines sériques autres que les IgG, et fournit une solution de concentration connue en mg/mL adaptée à la conjugaison — mais toutes les IgG de l’animal sont capturées, si bien que la fraction spécifique de la cible peut ne représenter qu’un faible pourcentage du total. Les protéines A et G diffèrent par leur affinité selon l’espèce hôte et les sous-classes, raison pour laquelle l’hôte est toujours indiqué.

La purification par affinité pour l’antigène fait passer le sérum sur du peptide immobilisé et n’élue que les anticorps qui s’y lient. Le produit est une IgG spécifique de la cible, donne un bruit de fond nettement plus faible et constitue le bon choix pour l’immunohistochimie, la conjugaison et tout ELISA quantitatif. Le rendement est bien plus faible, et l’élution à pH bas ou par agent chaotropique peut endommager les clones les plus avides.

Dans les deux cas, l’IgG purifiée est exprimée en mg/mL, ce qui permet un véritable titrage plutôt que les approximations par facteur de dilution propres au sérum total.

Termes et produits associés

polyclonal vs monoclonal · peptide bloquant · immunogène. Produits de référence : anticorps, anticorps marqués. Pour aller plus loin : antisérum vs IgG purifiée.