Purifikovaný IgG

Purifikovaný IgG znamená, že frakce imunoglobulinu G byla oddělena od zbytku antiséra. Označení zakrývá důležité rozlišení a produktový list, který neuvádí použitou metodu, je neúplný.

Dvě velmi odlišné purifikace

Purifikace pomocí proteinu A nebo proteinu G zachycuje IgG přes jeho oblast Fc. Odstraňuje albumin, proteázy a proteiny séra jiné než IgG a poskytuje roztok o známé koncentraci v mg/mL vhodný ke konjugaci — zachytí se však veškerý IgG zvířete, takže frakce specifická pro cíl může stále tvořit jen malé procento celku. Protein A a protein G se liší afinitou k hostitelským druhům a podtřídám, a proto se hostitel vždy uvádí.

Antigenní afinitní purifikace vede sérum přes imobilizovaný peptid a eluuje pouze protilátky, které se na něj vážou. Produktem je IgG specifický pro cíl, poskytuje výrazně nižší pozadí a je správnou volbou pro imunohistochemii, konjugaci a jakoukoli kvantitativní ELISA. Výtěžek je mnohem nižší a eluce při nízkém pH nebo chaotropními činidly může poškodit klony s nejvyšší aviditou.

V obou případech se purifikovaný IgG udává v mg/mL, což umožňuje skutečnou titraci namísto odhadování ředicího faktoru u celého séra.

Související pojmy a materiály

polyklonální vs. monoklonální · blokující peptid · imunogen. Referenční materiál: protilátky, značené protilátky. Další četba: antisérum vs. purifikovaný IgG.