IgG purificada

IgG purificada significa que a fração de imunoglobulina G foi separada do resto do antissoro. O rótulo esconde uma distinção importante, e uma ficha técnica que não especifique o método utilizado está incompleta.

Duas purificações muito diferentes

A purificação com proteína A ou proteína G captura a IgG através da sua região Fc. Remove a albumina, as proteases e as proteínas séricas que não são IgG, e produz uma solução de concentração conhecida em mg/mL adequada para conjugação — mas captura todas as IgG do animal, pelo que a fração específica do alvo pode continuar a ser apenas uma pequena percentagem do total. A proteína A e a proteína G diferem na afinidade para as espécies hospedeiras e subclasses, razão pela qual o hospedeiro é sempre indicado.

A purificação por afinidade ao antigénio faz passar o soro por péptido imobilizado e elui apenas os anticorpos que se lhe ligam. O produto é IgG específica do alvo, com ruído de fundo marcadamente inferior, e é a escolha certa para imuno-histoquímica, conjugação e qualquer ELISA quantitativo. O rendimento é muito menor, e a eluição a pH baixo ou com agentes caotrópicos pode danificar os clones de maior avidez.

Em qualquer dos casos, a IgG purificada é indicada em mg/mL, o que permite uma verdadeira titulação em vez das estimativas por fator de diluição do soro total.

Termos e material relacionados

policlonal vs monoclonal · péptido de bloqueio · imunogénio. Material de referência: anticorpos, anticorpos marcados. Leitura complementar: antissoro vs IgG purificada.