Oczyszczone IgG

Oczyszczone IgG oznacza, że frakcję immunoglobulin G oddzielono od reszty antysurowicy. Etykieta ukrywa jednak istotne rozróżnienie, a karta katalogowa, która nie precyzuje zastosowanej metody, jest niepełna.

Dwa bardzo różne sposoby oczyszczania

Oczyszczanie na białku A lub białku G wychwytuje IgG poprzez region Fc. Usuwa albuminę, proteazy i białka surowicy niebędące IgG oraz daje roztwór o znanym stężeniu w mg/mL, nadający się do koniugacji — ale wychwytywane są wszystkie IgG zwierzęcia, więc frakcja swoista wobec celu może nadal stanowić tylko niewielki procent całości. Białko A i białko G różnią się powinowactwem do gatunków gospodarza i podklas, dlatego zawsze podaje się gatunek gospodarza.

Oczyszczanie powinowactwowe na antygenie polega na przepuszczeniu surowicy przez unieruchomiony peptyd i wymyciu wyłącznie przeciwciał, które go wiążą. Produktem jest IgG swoiste wobec celu, dające wyraźnie niższe tło, i jest to właściwy wybór do immunohistochemii, koniugacji i wszelkich ilościowych testów ELISA. Wydajność jest znacznie niższa, a elucja w niskim pH lub czynnikami chaotropowymi może uszkodzić klony o najwyższej awidności.

W obu przypadkach stężenie oczyszczonego IgG podaje się w mg/mL, co pozwala na rzeczywiste miareczkowanie zamiast zgadywania współczynnika rozcieńczenia, jak w przypadku pełnej surowicy.

Powiązane terminy i materiały

poliklonalne a monoklonalne · peptyd blokujący · immunogen. Materiały referencyjne: przeciwciała, przeciwciała znakowane. Dalsza lektura: antysurowica a oczyszczone IgG.