Endotoksyna

Endotoksyna to lipopolisacharyd (LPS) z błony zewnętrznej bakterii Gram-ujemnych. Jest silnym aktywatorem receptora Toll-podobnego 4, wyzwalającym sygnalizację zapalną przy stężeniach rzędu pikogramów na mililitr, a mierzy się ją w jednostkach endotoksyny (EU), przy czym około 10 EU odpowiada 1 ng wzorcowego LPS.

Dlaczego endotoksyna ma znaczenie w badaniach peptydów

Stanowi odrębną specyfikację, ponieważ zwykłe badanie czystości jej nie wykrywa. Peptyd może mieć 99% czystości w HPLC, a mimo to zawierać tyle endotoksyny, że zdominuje ona odczyt immunologiczny, gdyż LPS nie jest zanieczyszczeniem pokrewnym peptydowi i nie pojawia się na chromatogramie. W hodowlach komórkowych, testach na makrofagach i testach immunologicznych kontaminacja wywołuje odpowiedzi cytokinowe łatwe do błędnego przypisania badanemu peptydowi — to dobrze udokumentowane źródło nieodtwarzalnych wyników.

Dominują dwie drogi kontaminacji: ekspresja rekombinowana w gospodarzach bakteryjnych, gdzie LPS oczyszcza się razem z produktem z samego gospodarza, oraz woda lub szkło laboratoryjne w procesach skądinąd syntetycznych. Endotoksyna jest termostabilna i przetrwa autoklawowanie, dlatego należy jej unikać, a nie liczyć na jej zniszczenie. Bada się ją testem LAL, a wynik podaje się w certyfikacie analizy tylko na wyraźne żądanie. Zob. czytanie COA oraz badania przez stronę trzecią.

Powiązane terminy

czystość