Endotoxina

A endotoxina é o lipopolissacárido (LPS) da membrana externa das bactérias Gram-negativas. É um potente ativador do recetor Toll-like 4, desencadeando sinalização inflamatória em concentrações de picogramas por mililitro, e mede-se em unidades de endotoxina (EU), em que cerca de 10 EU correspondem a 1 ng de LPS de referência.

Porque a endotoxina é importante na investigação de péptidos

É uma especificação separada porque os ensaios de pureza comuns não a conseguem ver. Um péptido pode ter 99% de pureza por HPLC e, ainda assim, conter endotoxina suficiente para dominar um parâmetro imunológico, uma vez que o LPS não é uma impureza relacionada com o péptido e não aparece no cromatograma. Em cultura celular e em ensaios com macrófagos e células imunitárias, a contaminação produz respostas de citocinas facilmente atribuídas por engano ao péptido em estudo — uma fonte bem documentada de resultados irreprodutíveis.

Predominam duas vias de contaminação: a expressão recombinante em hospedeiros bacterianos, em que o LPS é copurificado a partir do próprio hospedeiro, e a água ou o material de vidro em fluxos de trabalho que, de resto, são sintéticos. A endotoxina é termoestável e resiste à autoclavagem, pelo que tem de ser excluída em vez de destruída. O ensaio é feito por LAL e reportado no certificado de análise apenas quando especificamente solicitado. Veja como ler um COA e os ensaios por terceiros.

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