Endotoxin

Endotoxin ist Lipopolysaccharid (LPS) aus der äußeren Membran gramnegativer Bakterien. Es ist ein potenter Aktivator des Toll-like-Rezeptors 4, löst bereits in Konzentrationen im Pikogramm-pro-Milliliter-Bereich Entzündungssignale aus und wird in Endotoxin-Einheiten (EU) gemessen, wobei etwa 10 EU 1 ng Referenz-LPS entsprechen.

Warum Endotoxin in der Peptidforschung wichtig ist

Es ist eine eigene Spezifikation, weil gewöhnliche Reinheitsprüfungen es nicht erfassen. Ein Peptid kann laut HPLC zu 99% rein sein und dennoch genug Endotoxin enthalten, um einen immunologischen Messwert zu dominieren, da LPS keine peptidbezogene Verunreinigung ist und nicht im Chromatogramm erscheint. In Zellkultur-, Makrophagen- und Immunassays erzeugt eine Kontamination Zytokinantworten, die leicht fälschlich dem Testpeptid zugeschrieben werden — eine gut dokumentierte Quelle nicht reproduzierbarer Ergebnisse.

Zwei Kontaminationswege überwiegen: die rekombinante Expression in bakteriellen Wirten, bei der LPS aus dem Wirt selbst mitgereinigt wird, und Wasser oder Glaswaren in ansonsten synthetischen Arbeitsabläufen. Endotoxin ist hitzestabil und übersteht das Autoklavieren, daher muss es ausgeschlossen statt zerstört werden. Die Prüfung erfolgt per LAL-Assay und wird auf dem Analysenzertifikat nur auf ausdrückliche Anforderung angegeben. Siehe COA lesen und Prüfung durch Drittlabore.

Verwandte Begriffe

Reinheit