Glossar
TFA-Salz
Die meisten synthetischen Peptide werden als Trifluoracetat-Salze geliefert. Wie viel der Vial-Masse Gegenion ist und wann TFA zellbasierte Assays stört.
TFA-Salz bedeutet, dass das Peptid mit Trifluoracetat als Gegenion geliefert wird, gepaart mit den positiv geladenen basischen Resten der Sequenz. Das ist der Standard, weil Trifluoressigsäure sowohl zur Abspaltung des Peptids vom Harz am Ende der SPPS als auch als Ionenpaarreagenz in der präparativen Umkehrphasen-HPLC eingesetzt wird, sodass sie in jedem nachfolgenden Schritt vorhanden ist, sofern sie nicht gezielt ausgetauscht wird.
Warum die TFA-Salzform in der Peptidforschung wichtig ist
Zwei Konsequenzen: An erster Stelle steht die Massenbilanz. Der TFA-Gehalt liegt je nach Anzahl der basischen Reste in der Sequenz üblicherweise bei etwa 10% bis 25% des Bruttogewichts, sodass ein mit 5 mg deklariertes Vial merklich weniger als 5 mg Peptid enthalten kann. Jede Molaritätsberechnung sollte daher vom Nettopeptidgehalt auf dem Analysenzertifikat ausgehen, nicht vom Etikett.
Die zweite ist die Assaystörung. Rest-TFA wirkt Berichten zufolge auf einige Zelllinien zytotoxisch und beeinflusst Proliferationsmesswerte bei Konzentrationen, die weit unter denen liegen, die dem Peptid schaden, weshalb für zellbasierte Arbeiten oft stattdessen das Acetatsalz verlangt wird. TFA erzeugt zudem eine charakteristische Infrarotbande, die spektroskopische Arbeiten verfälschen kann. Siehe ein COA lesen.
Verwandte Begriffe
Reinheit · Hilfsstoff · synthetisch