Biotinelabel

Een biotinelabel is een molecuul biotine (vitamine B7) dat aan een peptide is geconjugeerd, normaal gesproken aan de N-terminus of aan een lysinezijketen. De waarde ervan ligt in de interactie met streptavidine: een dissociatieconstante in het femtomolaire bereik, een van de sterkste niet-covalente bindingen in de biologie, stabiel tegenover detergentia, hoge zoutconcentraties en matige denaturantia.

Hoe het wordt gebruikt en wat het beperkt

Gebiotinyleerde peptiden zijn het standaardinstrument voor pull-downs en doelwitidentificatie op magnetische streptavidinebolletjes, voor immobilisatie op met streptavidine gecoate ELISA-platen en SPR-chips, en voor versterkte detectie waarbij een streptavidine-HRP-conjugaat een gelabeld secundair antilichaam vervangt.

Drie praktische beperkingen keren steeds terug. Ten eerste de spacerlengte: de valeriaanzuurstaart van biotine is kort en de bindingspocket is diep, dus normaal gesproken wordt een aminohexaanzuur- of PEG-linker ingevoegd om het peptide bereikbaar te houden. Ten tweede endogeen biotine: weefsels zoals lever, nier en hersenen bevatten genoeg vrij biotine om te concurreren, wat een blokkeerstap met avidine/biotine vereist. Ten derde de elutie: de interactie is zo sterk dat het terugwinnen van intacte complexen doorgaans koken in SDS, een overmaat vrij biotine met lange incubatie of een vanaf het begin ingebouwde splitsbare linker vereist.

Gerelateerde termen en materiaal

FAM/FITC-label · I-125-radiolabel · zuiverheid. Referentiemateriaal: gelabelde peptiden, gelabelde antilichamen. Verder lezen: gids over gelabelde peptiden.