Marcatura con biotina

Una marcatura con biotina è una molecola di biotina (vitamina B7) coniugata a un peptide, normalmente all'N-terminale o sulla catena laterale di una lisina. Il suo valore risiede nell'interazione con la streptavidina: una costante di dissociazione nell'ordine femtomolare, uno dei legami non covalenti più forti in biologia, stabile a detergenti, alte concentrazioni saline e denaturanti moderati.

Come si usa e quali sono i suoi limiti

I peptidi biotinilati sono lo strumento standard per pull-down e identificazione dei bersagli su biglie magnetiche con streptavidina, per l'immobilizzazione su piastre ELISA e chip SPR rivestiti di streptavidina e per la rilevazione amplificata, in cui un coniugato streptavidina-HRP sostituisce un anticorpo secondario marcato.

Tre vincoli pratici ricorrono. Primo, la lunghezza dello spaziatore: la coda di acido valerico della biotina è corta e la tasca di legame è profonda, per cui si inserisce normalmente un linker di acido amminoesanoico o PEG per mantenere il peptide accessibile. Secondo, la biotina endogena: tessuti come fegato, rene e cervello contengono abbastanza biotina libera da competere, rendendo necessario un passaggio di blocco avidina/biotina. Terzo, l'eluizione: l'interazione è talmente forte che il recupero di complessi intatti richiede in genere l'ebollizione in SDS, un eccesso di biotina libera con incubazione prolungata o un linker scindibile previsto fin dall'inizio.

Termini e materiali correlati

marcatura FAM/FITC · radiomarcatura con I-125 · purezza. Materiale di riferimento: peptidi marcati, anticorpi marcati. Approfondimenti: guida ai peptidi marcati.