Glosario
Marcaje con biotina
La biotinilación dota a un péptido de un anclaje femtomolar para la captura con estreptavidina. Longitud del espaciador, biotina endógena y límites de elución.
Un marcaje con biotina es una molécula de biotina (vitamina B7) conjugada a un péptido, normalmente en el extremo N-terminal o en la cadena lateral de una lisina. Su valor reside en la interacción con la estreptavidina: una constante de disociación en el intervalo femtomolar, una de las uniones no covalentes más fuertes de la biología, estable frente a detergentes, alta fuerza iónica y desnaturalizantes moderados.
Cómo se utiliza y qué lo limita
Los péptidos biotinilados son la herramienta estándar para ensayos de pull-down e identificación de dianas con bolas magnéticas de estreptavidina, para la inmovilización en placas ELISA y chips SPR recubiertos de estreptavidina, y para la detección amplificada en la que un conjugado estreptavidina-HRP sustituye a un anticuerpo secundario marcado.
Se repiten tres limitaciones prácticas. Primera, la longitud del espaciador: la cola de ácido valérico de la biotina es corta y el bolsillo de unión es profundo, por lo que normalmente se intercala un conector de ácido aminohexanoico o de PEG para mantener el péptido accesible. Segunda, la biotina endógena: tejidos como el hígado, el riñón y el cerebro contienen suficiente biotina libre para competir, lo que exige un paso de bloqueo con avidina/biotina. Tercera, la elución: la interacción es tan fuerte que recuperar complejos intactos suele requerir ebullición en SDS, un exceso de biotina libre con incubación prolongada o un conector escindible diseñado desde el principio.
Términos y material relacionados
marcaje FAM/FITC · radiomarcaje con I-125 · pureza. Material de referencia: péptidos marcados, anticuerpos marcados. Lectura adicional: guía de péptidos marcados.